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荧光PCR冻干-DTT

发布时间:2020-07-27   点击次数:137次

二硫苏糖醇(简称为DTT)是一种小分子有机还原剂,其还原状态下为线性分子。DTT有什么特点?怎么保存呢?DTT是一种常用还原剂,有抗氧化作用,进口分装。DTT和巯基乙醇相比, DTT的刺激性气味要小很多,毒性也比巯基乙醇低很多。另外DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时,两者效果相近。DTT一般保存条件为-20℃保存。1M DTT溶液可以在-20℃保存2年以上。由于容易被空气氧化, DTT的稳定性较差;但冷冻保存或在惰性气体中处理能够延长它的使用寿命。DTT作为PCR的添加剂与DMSO、甜菜碱、BSA混合配制成的复合型添加剂,按照一定比例配比,能获得PCR扩增特异性和很高的PCR扩增产量。PCR的扩增反应并不是可以无穷地进行下去的,经过一定的循环周期后需扩增的片段不再按指数增多而逐渐进入平坡;进入平坡的循环次数,取决于起始时存在的模板拷贝数以及合成的DNA总量。所谓平坡就是批PCR循环的后期,合成产物达0.3~1pmol时,由于产物的堆积,使原来以指数增加的速率变成平坦的曲线。

试剂冻干机Pilot3-6T应用示例(荧光PCR冻干):

  1. 探针、底物、引物原料要求确定。
  2. 冻干溶液配方开发,采用正交法或响应曲面法进行辅料筛选。
  3. 选择适合的包材和模具。
  4. 设计冻干曲线配合辅料筛选。
  5. 确定配方及工艺。
  6. 稳定性测试。
  7. 根据稳定性测试结果修正工艺或配方。
  8. 整个环节注意环境、设备、人员的结合。

 

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