实时荧光定量PCR的方法

实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的方法有实时荧光PCR一步法与实时荧光PCR两步法。一步法与两步法有什么区别呢？一步法为反转录和PCR扩增在同一个管内完成。两步法为反转录和PCR扩增分两步进行，先从RAN模板反转录得到cDNA，得到的cDNA在进行一次或多次不同的PCR反应。一步法与两步法有那些优点呢？一步法: 快速, 简便, 敏感, 减少污染机会, 减少了RNA 二级结构, 聚合酶具有校正活性, 减少PCR 反应的错配率。两步法: 同一管中同时扩增两个引物, 减少了一些人为的误差; 将RNA 转录为cDNA, 易于保存，把反转录体系分开做，一次的转录产物可以多次用来做PCR，非常适用于摸索PCR条件。;两步法整个过程比一步法的费用少。一步法和两步法各有其特点，要按照试验的对象具体确定用那一种方法，对不适合于提取mRNA的样品只能用一步法RT-PCR方法。荧光PCR冻干设备技术要点：1.无外界干扰热量。2.内部温度均一。3.极限真空度好。4.设备过程控制能力强。试剂冻干机Pilot5-8T涉及产品有荧光PCR、免疫微球、化学发光、基因芯片、量子点、ELISA、胶体金、POCT、IVD校准品质控品校准品、内毒素检测试剂、血清、白蛋白、干细胞及相应提取物等。