外泌体差速超速离心提纯方法:
DUC 是最早和最常报道的外泌体分离策略。操作步骤如下。该方法过程简单,不引入其他标记,适用于大剂量样品分析。然而,鉴于细胞外液具有高度异质性,DUC 可导致非理想的外泌体聚集; 因此,它可能不是一种合适的外泌体纯化方法,因为大小相似的不同囊泡和蛋白质聚集体可以在 100,000 × g 下共同形成。因此,应进一步纯化使用该方法制备的外泌体。此外,离心力会导致外泌体结构的破坏,进而影响下游实验,特别是外泌体的功能分析。
外泌体冻干工艺开发与处方设计:
1. 核心目标: 保持外泌体完整性(膜结构、RNA/蛋白质活性);提高冻干后复溶性及长期稳定性。
2. 关键步骤与实验设计保护剂筛选:常用海藻糖、蔗糖、甘露醇等非还原性糖类,通过氢键稳定脂质双层结构,减少冰晶损伤。 实验方案:对比不同保护剂(如海藻糖浓度梯度)对外泌体粒径、Zeta电位、蛋白质含量的影响。
冻干曲线优化: 分析指标:水分残留量(<3%)、复溶时间(<1分钟)、形态(纳米流式检测,需要由用户完成)。
外泌体冻干可提供如下服务:
1. 提供外泌体冻干配方开发。
2. 提供外泌体冻干工艺曲线开发。
3. 提供外泌体冻干生产放大工艺开发。
4. 提供外泌体上下游冻干设备开发。